PIpetty電動移液器在動物布魯氏菌病檢測
（虎紅平板凝集試驗RBT）中的應用
     方 案 摘 要 ：

     動物布魯氏菌病危害畜牧業與公共衛生，虎紅平板凝集試驗（RBT）是重要篩查手段，但傳統手動移液易產生誤差。本方案應用 Pipetty 電動移液器開展 RBT 檢測，利用其高精度活塞系統精準移取試劑，借連續分液功能提升檢測效率。通過對比使用前后檢測準確性、重復性與耗時等指標評估效果，預期降低假陽性、假陰性率，縮短大規模樣本檢測時間，為疫病防控提供可靠技術支持。

 
  方 案 詳 情 ：
  一、實驗原理
      RBT是目前國內外應用最廣泛的布魯氏菌病抗體檢測篩選方法之一，該方法經濟、簡單快速、易操作，可人工判讀，也可通過與人工判讀比對等效的儀器判讀。WOAHISS 或國家標準血清稀釋，與抗原進行 RBT 試驗。標準血清 1：45 稀釋應觀察到凝集，呈陽性反應，標準血清1：55稀釋時觀察不到凝集，呈陰性反應。

二、?實驗準備

1、設配和材料

① Pipetty電動移液器5-1000 μL及無菌槍頭。
② 混勻棒、計時器。
③ 反應板。
  2、試劑和材料 ① 布魯氏菌虎紅平板凝集試驗抗原。
② 布魯氏菌陽性對照血清和陰性對照血清。
 
三、實驗步驟

1、在每次開始檢測樣品前，應用陽性對照血清和陰性對照血清分別與抗原進行反應，以確保試驗條件適于檢測。
2、將待檢血清和抗原從冰箱取出，平衡至室溫（22 ℃±4 ℃）。
3、使用Pipetty自動混勻功能輕輕混勻待檢血清后，設置連續分液模式，單次分液30μL，次數可按實驗需求設置，等量加到反應板上。

 
4、輕輕混勻抗原，在每份血清旁等量滴加30μL等量抗原。
5、立即將血清與抗原混合（每個樣品用一個干凈的混勻棒），混合成直徑約2cm的圓形或橢圓形。
 
6、 雙手端起反應板，按不同方向輕輕搖晃反應板，室溫（22 ℃±4 ℃）下作用4min后，在自然光或強燈光下立即觀察凝集情況。
注：檢測山羊和綿羊血清時，待檢血清與抗原的比例調整為3：1（如75μL血清：25μL抗原）能提高其檢測靈敏性。

四、結果判定

1、凝集反應程度分為5個等級：

a） ++++：出現大的凝集片或顆粒，凝集塊間液體完全清亮透明;
b） +++：有明顯凝集顆粒，凝集塊間液體幾乎清亮透明;
c） ++：有較明顯凝集顆粒，凝集塊間液體稍清亮透明;
d） +：有微弱凝集，凝集物間液體渾濁;
e） -：無凝集，反應混合液均勻渾濁。
 
2、同時滿足下列條件，判定試驗條件成立：
a）陽性對照血清出現“++”及以上凝集現象;
b）陰性對照血清無凝集“-”。
 
3、符合上述條件，結果判定如下：
a）待檢血清出現“+”及以上凝集現象時，判定為陽性;
b）待檢血清出現“-”時，判定為陰性。