方案摘要：本方案主要探討 PIpetty 電動移液器在基孔肯雅病毒核酸間接免疫熒光法（IFA）檢測中的具體應用。這款移液器擁有輕便小巧的特點，重量僅 75g，操作起來十分舒適。同時，它具備高精度的等量連續分液能力，能夠按照設定的移液量進行多次重復排液，并且配備了溫度控制功能，可避免因手部熱量影響而導致的精度降低。在檢測流程里，無論是，樣本稀釋還是連續加樣等關鍵步驟，該移液器都能發揮積極作用，有效提高檢測效率與準確性，減少實驗過程中的誤差，為基孔肯雅病毒的檢測工作提供堅實可靠的支持。

方案詳情：
一、實驗原理
       IFA就是先用待檢血清中的特異抗體（第一抗體）與固定在玻片上的CHIKV抗原反應，如果血清中存在CHIKV特異性IgM和IgG抗體，就會與熒光標記的抗人IgM和IgG抗體（第二抗體）結合，熒光顯微鏡下可見有特異熒光。
 
 
二、?實驗準備
1、設配和材料
① Pipetty電動移液器MSIC01-03-250、MSIC01-02-1000及滅菌吸頭；
② 熒光顯微鏡；
③ CHIKV抗原片（可用BHK-21、Vero 或 C6/36 等感染細胞制備，低溫、干燥、密封保存）；
④ 蓋玻片。

2、試劑和材料
① CHIKV抗體陽性對照血清、陰性對照血清；
② 熒光素標記抗人 IgG和IgM 熒光抗體；
③ 待檢患者血清標本；
④ 樣品稀釋液；
⑤ 磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.2）；
⑥ 吐溫 20。

三、實驗步驟
1、取出抗原片，平衡至室溫；
2、如果檢測 IgG 抗體，先用標本稀釋液稀釋待檢血清，使用Pipetty電動移液器的單次移液和自動混勻功能，從1∶10 開始，快速的倍比稀釋至所需要的滴度；

3、使用Pipetty電動移液器，設置連續分液模式，每孔50μL加到每個反應區域（標本量以覆蓋所有反應區為準），同時設置陽性對照（按說明書稀釋）、陰性對照（同比例稀釋的陰性血清）和空白對照（僅加 PBS）；

4、將加有標本的抗原片放置在濕盒內，37℃溫箱孵育 30min；
5、用含 2% 吐溫 20 的 PBS 沖洗抗原片，然后再漂洗 5 min；
6、取出抗原片，用吸水紙從抗原片背面和側面擦去洗液（不得擦拭反應區域），加入適量的熒光素標記抗人 IgM 或 IgG 熒光抗體，分別用于檢測IgM 或IgG 抗體（熒光抗體在使用前須根據說明書用 PBS 稀釋）；
7、將抗原片放置在避光的濕盒內，37℃溫箱孵育 30 min；
8、用含 2% 吐溫20 的 PBS 沖洗抗原片，再將抗原片放入含有1：8000 伊文思藍的吐溫 20的PBS中漂洗 5 min；
9、取出抗原片，用吸水紙從抗原片背面和側面擦去洗液（不得擦拭反應區域），用甘油緩沖液封片，蓋上蓋玻片，避免產生氣泡；
10、熒光顯微鏡下觀察結果。
四、結果判讀
1、特異性熒光顆粒在鏡下呈現黃綠色，如果抗原片的細胞胞漿中呈現出均勻的顆粒狀熒光，可判斷 CHIKV 特異抗體陽性。
2、根據熒光光亮度和陽性細胞在細胞總數中所占的比例可將熒光反應大致區分為“+~ ++++6）無特異熒光者為陰性。檢測抗體滴度時，抗體滴度為特異熒光達“++”時最高血清稀釋度的倒數。
3、如果陽性對照顯示非特異性熒光或陰性對照顯示清晰的熒光，試驗則不成立，需重復檢測。