實驗性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）模型的建立與評估_abio生物試劑品牌網
一、實驗性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）概述 實驗性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）是一種以特異性致敏的CD4+T細胞介導為主的自身免疫性疾病，其病理變化與多發性硬化（MS）類似。EAE模型是研究MS病理過程和發病機制的重要工具，在臨床神經免疫學研究中具有重要意義。
二、動物選擇 多種動物可用于EAE模型的建立，包括雞、小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、羊、犬和猴等。不同種屬或品系的動物對EAE的敏感性存在顯著差異。常用的敏感動物包括Lewis和DA大鼠、PL/J和SJL/J小鼠以及Hartley和StrAIn13豚鼠等。小鼠和大鼠的EAE模型在臨床表現、病理和免疫等方面與人類脫髓鞘疾病較為相似，因此應用最為廣泛。
三、建模方法
（一）主動誘導法 主動誘導法是通過將抗原與佐劑混合后注射到動物體內，經過一定時間的潛伏期誘導EAE的產生。常用的致敏抗原有髓鞘堿性蛋白（MBP）、蛋白脂（PLP）、髓寡樹突細胞糖蛋白（MOG）等。
1、抗原與佐劑的混合：抗原需與佐劑（如完全弗氏佐劑，CFA）混合制成乳劑。CFA能提高抗原的免疫反應強度并延長免疫時間，而百日咳毒素（PTX）可增加血管通透性，促進T細胞通過血腦屏障。
2、注射途徑：常用的注射途徑包括皮下、腹腔和尾靜脈等，其中皮下多點注射和腳墊注射的發病率較高。
（二）被動轉移實驗 被動轉移實驗通過將EAE抗原特異反應性T細胞轉輸給同一品系的健康動物，使其發病。這是研究EAE發病機制的直接證據，也是研究治療和預防措施的良好模型。
四、模型判定標準
（一）神經功能評分 根據Kono等提出的標準，神經功能評分分為5級：1級為尾部無力，2級為尾部無力加肢體無力，3級為肢體輕度麻痹，4級為肢體嚴重麻痹，5級為瀕死狀態。 （二）病理檢測結果 通過HE染色等方法檢查中樞神經系統的炎癥和脫髓鞘情況。EAE模型組小鼠脊髓中可見大量炎性細胞聚集，髓鞘結構松散、崩解，密度降低。 （三）免疫熒光雙染結果 EAE模型組小鼠脊髓中活化的小膠質細胞數量增多，而活化星形膠質細胞數量減少。 （四）細胞流式分析 EAE模型小鼠中致炎細胞Th17數量顯著增加，抑炎細胞Treg和Breg數量顯著降低。
五、以小鼠為例的MOG誘導EAE模型建立
前期準備
1、完全弗氏佐劑（CFA）的配制 ：將結核分枝桿菌加入弗氏不完全佐劑（IFA）中，充分混勻后置于4℃冰箱備用。
2、百日咳毒素儲存液（PTX）的配制 ：將百日咳毒素溶解于PBS中，儲存于4℃冰箱。
3、抗原佐劑乳化物的制備 ：將MOG 35-55多肽與CFA混合乳化，形成油包水混合物。
模型制備
1、動物選擇 ：選擇6-8周齡、18-25克的雌性C57BL/6小鼠，確保品系純正和SPF級飼養環境。
2、注射與處理 ：
六、結語 EAE模型是研究MS病理機制和治療方法的重要工具。通過優化建模方法和評估標準，EAE模型為揭示MS的發病機制和開發新的治療策略提供了有力支持。
杭州斯達特 (www.starter-bio.com) 志在為全球生命科學行業提供優質的抗體、蛋白、試劑盒等產品及研發服務。依托多個開發平臺：重組兔單抗、重組鼠單抗、快速鼠單抗、重組蛋白開發平臺（E.coli,CHO,HEK293,InsectCells）,已正式通過歐盟98/79/EC認證、ISO9001認證、ISO13485。
二、動物選擇 多種動物可用于EAE模型的建立，包括雞、小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、羊、犬和猴等。不同種屬或品系的動物對EAE的敏感性存在顯著差異。常用的敏感動物包括Lewis和DA大鼠、PL/J和SJL/J小鼠以及Hartley和StrAIn13豚鼠等。小鼠和大鼠的EAE模型在臨床表現、病理和免疫等方面與人類脫髓鞘疾病較為相似，因此應用最為廣泛。
三、建模方法
（一）主動誘導法 主動誘導法是通過將抗原與佐劑混合后注射到動物體內，經過一定時間的潛伏期誘導EAE的產生。常用的致敏抗原有髓鞘堿性蛋白（MBP）、蛋白脂（PLP）、髓寡樹突細胞糖蛋白（MOG）等。
1、抗原與佐劑的混合：抗原需與佐劑（如完全弗氏佐劑，CFA）混合制成乳劑。CFA能提高抗原的免疫反應強度并延長免疫時間，而百日咳毒素（PTX）可增加血管通透性，促進T細胞通過血腦屏障。
2、注射途徑：常用的注射途徑包括皮下、腹腔和尾靜脈等，其中皮下多點注射和腳墊注射的發病率較高。
（二）被動轉移實驗 被動轉移實驗通過將EAE抗原特異反應性T細胞轉輸給同一品系的健康動物，使其發病。這是研究EAE發病機制的直接證據，也是研究治療和預防措施的良好模型。
四、模型判定標準
（一）神經功能評分 根據Kono等提出的標準，神經功能評分分為5級：1級為尾部無力，2級為尾部無力加肢體無力，3級為肢體輕度麻痹，4級為肢體嚴重麻痹，5級為瀕死狀態。 （二）病理檢測結果 通過HE染色等方法檢查中樞神經系統的炎癥和脫髓鞘情況。EAE模型組小鼠脊髓中可見大量炎性細胞聚集，髓鞘結構松散、崩解，密度降低。 （三）免疫熒光雙染結果 EAE模型組小鼠脊髓中活化的小膠質細胞數量增多，而活化星形膠質細胞數量減少。 （四）細胞流式分析 EAE模型小鼠中致炎細胞Th17數量顯著增加，抑炎細胞Treg和Breg數量顯著降低。
五、以小鼠為例的MOG誘導EAE模型建立
前期準備
1、完全弗氏佐劑（CFA）的配制 ：將結核分枝桿菌加入弗氏不完全佐劑（IFA）中，充分混勻后置于4℃冰箱備用。
2、百日咳毒素儲存液（PTX）的配制 ：將百日咳毒素溶解于PBS中，儲存于4℃冰箱。
3、抗原佐劑乳化物的制備 ：將MOG 35-55多肽與CFA混合乳化，形成油包水混合物。
模型制備
1、動物選擇 ：選擇6-8周齡、18-25克的雌性C57BL/6小鼠，確保品系純正和SPF級飼養環境。
2、注射與處理 ：
- 麻醉小鼠，對注射部位進行消毒。
- 每側皮下注射抗原佐劑乳化物100μl，隨后腹腔注射PTX。
- 48小時后再次腹腔注射PTX，第七天加強免疫。
六、結語 EAE模型是研究MS病理機制和治療方法的重要工具。通過優化建模方法和評估標準，EAE模型為揭示MS的發病機制和開發新的治療策略提供了有力支持。
杭州斯達特 (www.starter-bio.com) 志在為全球生命科學行業提供優質的抗體、蛋白、試劑盒等產品及研發服務。依托多個開發平臺：重組兔單抗、重組鼠單抗、快速鼠單抗、重組蛋白開發平臺（E.coli,CHO,HEK293,InsectCells）,已正式通過歐盟98/79/EC認證、ISO9001認證、ISO13485。
