定點偶聯(lián)技術(shù)在抗體偶聯(lián)藥物（ADC）中的應(yīng)用_abio生物試劑品牌網(wǎng)
基于工程化氨基酸的定點偶聯(lián)
半胱氨酸定點偶聯(lián)（THIOMAB技術(shù)）
THIOMAB技術(shù)是首個利用工程化半胱氨酸殘基實現(xiàn)定點偶聯(lián)的方法。通過在抗體重鏈（HC）或輕鏈（LC）的特定位點引入未配對的半胱氨酸，利用硫醇-馬來酰亞胺化學(xué)反應(yīng)實現(xiàn)細胞毒素的精確偶聯(lián)。該方法生成的ADC具有近乎均一的藥物-抗體比（DAR），并顯著提高了治療指數(shù)。多個基于THIOMAB技術(shù)的ADC已進入臨床試驗，然而，并非所有半胱氨酸工程化ADC都取得了臨床成功。
硫醇橋聯(lián)偶聯(lián)
硫醇橋聯(lián)技術(shù)利用雙功能連接子捕獲兩個游離的半胱氨酸硫醇基團，生成DAR4的ADC，顯著降低了異質(zhì)性例。
谷氨酰胺定點偶聯(lián)
谷氨酰胺殘基可通過微生物轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶（MTGase）進行酶促修飾，實現(xiàn)定點偶聯(lián)。該方法將含胺的細胞毒素或間隔子偶聯(lián)至去糖基化抗體的HC-Q295位點，無需使用還原劑或氧化劑。
基于非天然氨基酸的定點偶聯(lián)
通過在抗體中引入非天然氨基酸（如對乙酰苯丙氨酸pAF、對疊氮甲基-L-苯丙氨酸pAMF和疊氮賴氨酸），可實現(xiàn)細胞毒素的精確和定量偶聯(lián)。該方法生成的ADC具有均一的DAR、高效性和良好的穩(wěn)定性，但也面臨抗體表達困難和潛在免疫原性等挑戰(zhàn)。
基于糖工程的定點偶聯(lián)
糖工程技術(shù)利用抗體CH2結(jié)構(gòu)域中的N297糖鏈進行定點偶聯(lián)。目前已開發(fā)了多種方法將細胞毒素偶聯(lián)至糖鏈的不同單糖上，包括巖藻糖、半乳糖、N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）、N-乙酰氨基葡萄糖（GlcNAc）和唾液酸（SA）。
巖藻糖偶聯(lián)
Okeley等人報道了利用6-硫代巖藻糖（一種巖藻糖類似物）進行代謝標記，隨后通過馬來酰亞胺化學(xué)反應(yīng)實現(xiàn)偶聯(lián)，生成DAR為1.3的ADC。該方法生成的ADC具有良好的血漿穩(wěn)定性和顯著的抗腫瘤活性。
半乳糖偶聯(lián)
半乳糖或其類似物可通過半乳糖基轉(zhuǎn)移酶引入抗體。Synaffix的GlycoConnect技術(shù)利用內(nèi)切糖苷酶和糖基轉(zhuǎn)移酶將天然糖鏈轉(zhuǎn)化為均一的疊氮標記三糖，隨后通過無金屬點擊化學(xué)反應(yīng)實現(xiàn)偶聯(lián)。該技術(shù)已應(yīng)用于多個臨床階段的ADC。
唾液酸偶聯(lián)
唾液酸（SA）可通過酶促轉(zhuǎn)移至抗體，隨后通過高碘酸氧化與含氨氧基的細胞毒素偶聯(lián)。另一種方法是通過無銅點擊化學(xué)反應(yīng)將C9-疊氮化SA轉(zhuǎn)移至抗體，并與含細胞毒素的DBCO偶聯(lián)。
糖工程技術(shù)的優(yōu)勢在于無需改變氨基酸序列即可實現(xiàn)糖鏈偶聯(lián)，但需要特殊的試劑和酶。
基于短肽標簽的定點偶聯(lián)
短肽標簽（通常為4-6個氨基酸）可通過酶促反應(yīng)實現(xiàn)定點偶聯(lián)。
谷氨酰胺標簽偶聯(lián)
Strop等人開發(fā)了谷氨酰胺標簽（如LLQG），利用MTGase實現(xiàn)細胞毒素的定點偶聯(lián)。該方法生成的ADC具有均一的DAR2，并表現(xiàn)出強效的抗腫瘤活性。
轉(zhuǎn)肽酶介導(dǎo)的偶聯(lián)
轉(zhuǎn)肽酶可催化轉(zhuǎn)肽反應(yīng)，實現(xiàn)定點偶聯(lián)。
結(jié)論
定點偶聯(lián)技術(shù)，包括工程化氨基酸、非天然氨基酸、糖工程和短肽標簽，顯著推動了ADC的發(fā)展，生成了均一性高、治療指數(shù)優(yōu)異的ADC。這些新一代偶聯(lián)技術(shù)確保了批次間的一致性，并為腫瘤治療領(lǐng)域帶來了更多突破。未來的研究將進一步優(yōu)化這些技術(shù)，推動ADC藥物的進一步發(fā)展。
參考文獻
1.Site-Specific Antibody Conjugation for ADC and Beyond.
2.Chemical Linkers in Antibody–Drug Conjugates (ADCs).
3.Site-specific conjugation of a cytotoxic drug to an antibody improves the therapeutic index.
4.Site-Specific Antibody?Drug Conjugation through Glycoengineering.
5.Site-specific conjugation of a cytotoxic drug to an antibody improves the therapeutic index.
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