人非小細胞肺癌細胞A549、人表皮癌細胞/鱗癌A431培養使用說明書_abio生物試劑品牌網
培養條件：
細胞收到后處理
培養至良好狀態后灌滿完全培養液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞后先不開瓶蓋，請及時核對培養瓶上標注的細胞名稱是否與訂購的細胞名稱一致以及培養瓶是否有破損或漏液等異常情況。若沒有發現漏液、污染等異常情況顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據，不提供照片默認收到狀態良好。
貼壁細胞傳代步驟如下：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液約1-2ml至培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上 完全培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，使之完全脫落后吸出，然后將懸液轉移至15ml離心管中，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 完全 培養 基重懸。
4. 將細胞懸液按1：2的比例進行分瓶傳代（兩個T25瓶），補充新的完全培養基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO 2的細胞培養箱中培養。
懸浮細胞傳代步驟日下：
1、半換液法
半換液處理，豎著培養瓶在培養箱靜置1小時左右，輕輕吸掉3ml左右培養基，然后補給3ml的完全培養基，如果培養基變色慢，可直接加500ul左右FBS，傳代的時候可以直接補給5ml培養基 分兩個培養瓶培養，一般這樣傳代3次左右可以離心傳代一次，去掉死細胞。
2、離心換液法
如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
b、 細胞凍存：
1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄T25培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5ml完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心 5min；
3、 棄上清，沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液（貨號：C7001），混勻后加入凍存管中。
4、 將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要將細胞轉入液氮罐中，則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上再轉入液氮罐中。
c、細胞復蘇：
注意事項：
有些細胞貼壁不牢，在運輸過程中容易發生細胞脫落，這是正常現象。如脫離較多可將培養瓶所有培養液收集至離心管，1000rpm離心5min， 收集上清 作過渡培養 （后期對比培養），沉淀加入胰酶1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml完全培養基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml完全培養基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的完全培養基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO 2細胞培養箱中培養。
1）細胞出現問題，可重發的情況有哪些？判定標準是什么？
1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發；
2. 細胞污染問題，請在收到產品48小時內，給我們提出真實的實驗結果，核實后重發；
3. 常溫發貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇后24小時后，絕大多數細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態照片），重發；
4. 干冰凍存發貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發貨的細胞靜置4小時候并且未開封，出現污染，重發；
5. 細胞活性問題，請在收到產品7天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發；
6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，3天未告知的，視為產品合格。4-7天內出現問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的，并跟技術人員溝通的，由技術人員判定為我方責任的，重發。技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協商處理或者按合同價的50%收費重發。
2 ）細胞出現問題，不予以重發的情況有哪些？
1. 客戶造成細胞污染，不重發；
2. 客戶不正確操作致細胞狀態不好，不重發；
3. 非本庫推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發；
4. 細胞狀態不好，未提供細胞培養前3天照片的，不重發；
5. 細胞培養時經其它處理的，不重發；
6. 細胞收到2天內，未告知，不重發；
7. 視具體情況而定。
| 培養條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | ||
| 傳代方法 | 第一次建議1:2傳代 | 傳代情況 | 2天換液 |
| 備注 | 建議同時購買完培，同時購買非常優惠 | ||
細胞收到后處理
培養至良好狀態后灌滿完全培養液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞后先不開瓶蓋，請及時核對培養瓶上標注的細胞名稱是否與訂購的細胞名稱一致以及培養瓶是否有破損或漏液等異常情況。若沒有發現漏液、污染等異常情況顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據，不提供照片默認收到狀態良好。
貼壁細胞傳代步驟如下：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液約1-2ml至培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上 完全培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，使之完全脫落后吸出，然后將懸液轉移至15ml離心管中，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 完全 培養 基重懸。
4. 將細胞懸液按1：2的比例進行分瓶傳代（兩個T25瓶），補充新的完全培養基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO 2的細胞培養箱中培養。
懸浮細胞傳代步驟日下：
1、半換液法
半換液處理，豎著培養瓶在培養箱靜置1小時左右，輕輕吸掉3ml左右培養基，然后補給3ml的完全培養基，如果培養基變色慢，可直接加500ul左右FBS，傳代的時候可以直接補給5ml培養基 分兩個培養瓶培養，一般這樣傳代3次左右可以離心傳代一次，去掉死細胞。
2、離心換液法
如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
b、 細胞凍存：
1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄T25培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5ml完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心 5min；
3、 棄上清，沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液（貨號：C7001），混勻后加入凍存管中。
4、 將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要將細胞轉入液氮罐中，則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上再轉入液氮罐中。
c、細胞復蘇：
- 從液氮中取出細胞凍存管（注意佩戴防護面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
- 將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；
- 棄上清，沉淀用5ml完全培養基重懸，接種至T25培養瓶，放于37℃,5%CO2細胞培養箱中培養；
- 第二天，換用新鮮完全培養基繼續培養。
注意事項：
有些細胞貼壁不牢，在運輸過程中容易發生細胞脫落，這是正常現象。如脫離較多可將培養瓶所有培養液收集至離心管，1000rpm離心5min， 收集上清 作過渡培養 （后期對比培養），沉淀加入胰酶1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml完全培養基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml完全培養基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的完全培養基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO 2細胞培養箱中培養。
1）細胞出現問題，可重發的情況有哪些？判定標準是什么？
1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發；
2. 細胞污染問題，請在收到產品48小時內，給我們提出真實的實驗結果，核實后重發；
3. 常溫發貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇后24小時后，絕大多數細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態照片），重發；
4. 干冰凍存發貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發貨的細胞靜置4小時候并且未開封，出現污染，重發；
5. 細胞活性問題，請在收到產品7天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發；
6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，3天未告知的，視為產品合格。4-7天內出現問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的，并跟技術人員溝通的，由技術人員判定為我方責任的，重發。技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協商處理或者按合同價的50%收費重發。
2 ）細胞出現問題，不予以重發的情況有哪些？
1. 客戶造成細胞污染，不重發；
2. 客戶不正確操作致細胞狀態不好，不重發；
3. 非本庫推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發；
4. 細胞狀態不好，未提供細胞培養前3天照片的，不重發；
5. 細胞培養時經其它處理的，不重發；
6. 細胞收到2天內，未告知，不重發；
7. 視具體情況而定。
