抗體藥物，包括單抗、雙抗、抗體片段、抗體偶聯(lián)藥物以及抗體融合蛋白等，具有靶向性強(qiáng)、特異性高和毒副作用小等特點(diǎn)，在自身免疫疾病與抗腫瘤領(lǐng)域大放異彩。面對龐大的市場需求，開發(fā)新型抗體藥物，優(yōu)化下游生產(chǎn)工藝，具有非常重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值與社會(huì)意義。

抗體純化工藝

抗體純化過程復(fù)雜，需結(jié)合多種分離手段設(shè)計(jì)出合理的純化流程，才能高效地獲得高質(zhì)量產(chǎn)品。抗體下游工藝通常由以下步驟構(gòu)成：

• 細(xì)胞澄清收獲，通過離心和過濾等方法去除細(xì)胞和細(xì)胞碎片；
• 親和捕獲， Protein A 親和層析捕獲抗體；
• 低pH孵育去除病毒；
• 中間純化與精純，去除產(chǎn)品和過程相關(guān)雜質(zhì)；
• 納濾與超濾，去除病毒獲得最終抗體產(chǎn)品。

抗體分離純化中的層析技術(shù)

捕獲
該步驟目的是從大量成分復(fù)雜的發(fā)酵液中快速捕獲目的抗體，Protein A 源于金黃色葡萄球菌，特異性結(jié)合IgG FC片段，往往一步純化即可達(dá)到90%以上的純度，能捕獲人源抗體（非IgG3）及FC融合蛋白，是捕獲抗體蛋白最有效的層析手段。低pH洗脫銜接低pH孵育，病毒可有效減少7-8 log，后續(xù)僅需1-2步純化即可完成整個(gè)抗體的純化。選擇Protein A層析介質(zhì)時(shí)，載量、流速、耐堿性、使用壽命以及Protein A殘留量是主要考量因素。

中間純化與精純
為達(dá)安全純度，捕獲后的抗體樣品應(yīng)進(jìn)一步去除宿主蛋白、宿主DNA、聚集體、抗體片段、內(nèi)毒素和脫落的Protein A等產(chǎn)品和過程相關(guān)雜質(zhì)，離子交換層析與疏水層析是該步驟常用的層析手段。

離子交換層析是依據(jù)抗體與雜質(zhì)的帶電性差異來實(shí)現(xiàn)分離純化的目的，是抗體純化過程中關(guān)鍵步驟。陰離子交換層析常采用流穿模式去除內(nèi)毒素、病毒、HCD、HCP等雜質(zhì)。而陽離子交換層析則常選擇結(jié)合洗脫模式，在酸性條件下，多數(shù)抗體結(jié)合在介質(zhì)上，通過增加洗脫緩沖液中的鹽濃度或提高pH進(jìn)行洗脫，除雜效果明顯，尤其是兼具高分辨率與高選擇性的陽離子交換層析介質(zhì)例如MegaPoly BXS、Diamond CD-S以及Diamond SP Mustang等在去除聚集體、宿主蛋白 HCP以及Protein A 方面效果顯著。

疏水層析與離子交換層析互補(bǔ)，多數(shù)情況下抗體的疏水性要強(qiáng)于大部分雜質(zhì)，主要用于抗體聚集體和 HCP 的去除。HIC 介質(zhì)的疏水性對收率和雜質(zhì)去除效果有較大影響，因此選擇合適的配基是疏水層析的關(guān)鍵，常見的疏水作用層析配基的疏水性強(qiáng)弱順序如下：Butyl-S＜Butyl＜Octyl＜Phenyl。

除此之外，例如Diamond MMC與Diamond MIX-A等兼具疏水作用與離子交換作用的多模式填料越來越受到重視，這類新型的混合模式介質(zhì)對宿主蛋白、脫落的配基以及多聚體等雜質(zhì)具有高效的去除能力，可有效簡化純化步驟，增加純化效率。

隨著抗體藥物在臨床治療中的廣泛應(yīng)用，下游純化工藝的開發(fā)顯得越發(fā)重 要，靈活運(yùn)用各種層析模式與正確選擇層析填料將為抗體純化提供更經(jīng)濟(jì)高效的工藝路線。

關(guān)于博格隆
博格隆成立于2008年，是一家專注于為分離純化提供高質(zhì)量層析介質(zhì)的高新技術(shù)企業(yè)，是中國較早具備大規(guī)模生產(chǎn)分離純化介質(zhì)能力的企業(yè)之一。博格隆所提供的產(chǎn)品涵蓋各類分離純化介質(zhì)、預(yù)裝柱、實(shí)驗(yàn)室及工業(yè)生產(chǎn)級空柱、微載體，同時(shí)提供分離純化工藝開發(fā)服務(wù)及填料定制。