題目：A constitutive interferon-high immunophenotype defines response to immunotherapy in colorectal cancer
期刊：Cancer cell 
IF：48.8
Doi: 10.1016/j.ccell.2024.12.008

 
免疫檢查點抑制劑（ICI）療法的出現，徹底改變了晚期或轉移性錯配修復缺陷（dMMR）和微衛星高度不穩定性（MSI-H）結直腸癌（CRC）患者的治療格局，大幅提升了無進展生存期（PFS）。然而， dMMR CRC因其高突變負荷（TMB），理論上更易對免疫療法產生反應，但實際響應率不足50%；此外，絕大多數具備正常錯配修復功能的pMMR CRC患者則幾乎無法受益。腫瘤免疫微環境（TIME）的復雜機制是影響治療效果的關鍵，但其具體調控機制目前仍未明晰。本文通過多區域轉錄組分析及單細胞空間轉錄組技術檢測（SMI），深入解析了兩種CRC亞型腫瘤與免疫環境的互作關系，發現了獨立于TMB和MMR狀態的新型免疫治療反應標志物，為精準治療和擴大免疫療法應用帶來了新的希望。 

研究收集了來自28例dMMR和30例pMMR結直腸癌患者的59個腫瘤樣本，兩組患者在年齡和腫瘤分期上的分布相似。另有23例dMMR患者（24個腫瘤樣本）接受了抗PD-1免疫檢查點抑制劑治療，依據治療反應被分為應答組和非應答組。

空間轉錄組學技術手段

1、利用激光顯微切割（LCM）技術對腫瘤核心區和浸潤邊緣區域進行了精確分區，分別選取腫瘤上皮Te、腫瘤間質Ts及相鄰正常上皮（Ne）區域，進行轉錄組測序。

2、通過兩例ICI應答的dMMR和兩例IFN-high型的pMMR CRC樣本，利用CosMx SMI技術在單細胞水平上獲取了細胞的空間位置以及轉錄組信息。

文章主要結果

1、研究團隊利用激光顯微切割（LCM）技術，精確分割到結直腸癌核心區與浸潤邊緣區域的腫瘤上皮（Te）、腫瘤相關間質（Ts）及相鄰正常上皮（Ne），通過優化文庫構建實現高質量轉錄組測序。結果顯示，組織類型（Te vs. Ts）對基因表達影響遠大于不同CRC亞型之間的差異，且dMMR亞型展現出更高的異質性，而pMMR亞型基因表達更豐富，可能關聯其干性表型。腫瘤核心與邊緣區域異質性較小。功能分析揭示IFN反應、STING通路及腫瘤干性等在不同亞型間差異顯著，暗示腫瘤內在特征與免疫微環境的復雜互作。

LCM揭示腫瘤內部異質性

2、研究團隊借助CosMx SMI技術，實現了細胞空間位置與細胞轉錄組信息的同步獲取。結果顯示，緊鄰T細胞的腫瘤相關巨噬細胞（TAMs）中，抗原呈遞（APP）相關基因（如CD74、HLA-DRA）顯著上調，同時干擾素響應（IFN response）通路相關基因也表現活躍。此現象表明，T細胞不僅通過細胞接觸，還可能通過分泌細胞因子調控TAMs的免疫激活狀態，增強其抗原呈遞功能，推動腫瘤微環境的免疫應答。更為重要的是，這種轉錄變化同樣在鄰近T細胞的腫瘤上皮細胞中出現，腫瘤細胞中CD74、ICAM1、STING等免疫調控基因顯著升高，提示非抗原呈遞細胞也能被T細胞激活，顯示腫瘤微環境的高度可塑性和復雜的免疫互作。
 
T細胞誘導的TAM和CRC細胞中的CD74過表達

3、進一步的機制研究發現，CD74在鄰近T細胞的TAMs和腫瘤細胞中均呈現出顯著的高表達水平。特別是在IFN-high型免疫表型的結直腸癌中，CD74的表達模式高度一致且穩定。通過結合多組學數據和臨床免疫檢查點抑制劑（ICI）療效分析，發現CD74是一個具有顯著區分能力的免疫表型標志物。CD74能夠跨組織區室有效預測患者對ICI治療的反應。這一發現不僅揭示了腫瘤免疫微環境中T細胞對抗原呈遞機制的調控作用，也為精準免疫治療提供了潛在的生物標志物，助力臨床個性化治療方案的制定和療效監測。
 
跨物種驗證CD74作為免疫治療預測標志物

總結

本研究通過激光顯微切割（LCM）+轉錄組測序、空間轉錄組（CosMx SMI）及臨床樣本驗證等多維手段，系統描繪了結直腸癌不同亞型中腫瘤上皮（Te）與基質（Ts）之間的分子差異和免疫互作。研究發現，組織類型對表達譜的影響遠大于分子亞型，dMMR腫瘤呈現更強異質性，而pMMR更具“干性”特征。空間層面上，Te與Ts表達譜相互交錯，提示邊界模糊，區域異質性較低。

利用CosMx高分辨率空間轉錄組平臺，研究進一步揭示T細胞對局部微環境的深遠影響。無論是TAMs還是腫瘤上皮細胞，在靠近T細胞時均顯著上調抗原呈遞（APP）和干擾素（IFN）響應通路基因。這一現象表明，免疫信號可塑性并非僅限于專業免疫細胞，而是可滲透至腫瘤細胞本身。

進一步驗證顯示，CD74作為關鍵的抗原呈遞相關分子，在T細胞鄰近區中持續高表達，并能跨組織區室穩定預測患者對免疫檢查點抑制劑（ICI）的應答。結合小鼠模型和多個臨床隊列數據，CD74被確立為具臨床轉化潛力的空間免疫表型標志物。