方案摘要：通過自動化精準控制培養(yǎng)基的特異性成分、滅菌條件和分裝精度，結(jié)合酶底物熒光技術(shù)或選擇性培養(yǎng)原理，實現(xiàn)從 “樣本接種 - 培養(yǎng) - 結(jié)果判讀” 的全流程標準化。其核心價值在于利用設(shè)備的技術(shù)優(yōu)勢，突破傳統(tǒng)手工操作的誤差瓶頸，為飲用水中埃希氏菌的快速、準確檢測提供可靠支撐，助力保障飲用水微生物安全。
 
方案詳情：
實驗原理基于總大腸菌群多管發(fā)酵法，當初發(fā)酵培養(yǎng)物呈陽性時，取菌液接種于含 β- 葡萄糖醛酸酶特異性熒光底物的培養(yǎng)基。由于大腸埃希氏菌可分泌β- 葡萄糖醛酸酶，該酶能催化熒光底物發(fā)生水解反應(yīng)，生成具熒光活性的產(chǎn)物。通過紫外激發(fā)熒光檢測技術(shù)，觀察培養(yǎng)物是否產(chǎn)生特征性熒光，從而實現(xiàn)對水中大腸埃希氏菌的定性檢測。此方法利用目標菌的酶活性差異，將總大腸菌群的初篩與埃希氏菌的特異性鑒別相結(jié)合。
 
二、實驗準備
1、培養(yǎng)基和試劑
① EC-MUG培養(yǎng)基
 
2、儀器與設(shè)備
① 紫外燈：6W，波長為366nm。
② 培養(yǎng)箱。
③ 電子天平。
④ 平皿：直徑9CM。
⑤ 無菌試管：約15MM×160MM。
⑥ 錐形瓶：1000ML。
⑦ 小倒管。
⑧ 接種環(huán)。
⑨ RAYPA培養(yǎng)基自動制備分裝儀。
 
三、實驗步驟
1、接種：使用RAYPA培養(yǎng)基自動制備分裝儀，通過自動制備、高壓滅菌及自動分裝功能，將EC-MUG培養(yǎng)基分裝至試管中，然后用無菌接種環(huán)貨無菌棉簽將總大腸菌群多管發(fā)酵法在初發(fā)酵時產(chǎn)酸產(chǎn)氣的試管中液體接種到EC-MUG管中。實驗室生物安全要求應(yīng)依據(jù)GB 19489。
 
2、培養(yǎng)：將已接種的EC-MUG管在培養(yǎng)箱中44.5℃±0.5℃培養(yǎng)24h±2h。
實驗數(shù)據(jù)處理    將培養(yǎng)后的EC-MUG管在暗處用紫外燈照射，如果有藍色熒光產(chǎn)生則表示水樣中含有大腸埃希氏菌。
   計算EC-MUG陽性的管數(shù)，查對應(yīng)的MPN表得出大腸埃希氏菌的MPN值，結(jié)果以MPN/100ML報告。